人兽共患寄生虫病候选疫苗分子筛选方法研究进展

人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和保护易感群是控制人兽共患寄生虫病流行的综合防控措施。在综合防控策略中,疫苗的使用是切断循环链、控制乃至消灭人兽共患寄生虫病的理想和有效途径之一。选用高效的抗原筛选方法挖掘潜在的疫苗候选分子是开发疫苗的前提和关键。抗原筛选技术的更新换代使得研究者发掘出了更多新抗原和保护性多肽。现有的抗原筛选方法主要包括传统的粗抗原筛选法、cDNA文库筛选法、蛋白质组学筛选法、生物信息学及多组学技术联合筛选法。很多抗原筛选的方法是伴随寄生虫疫苗研究的发展应运而生的,粗抗原筛选法是基于抗原抗体相互反应的免疫学原理而设计的,此方法筛选的天然抗原可引起机体较强的免疫反应;cDNA文库筛选抗原的优势在于筛选更有针对性,所以候选产物的成分更单一、明确;蛋白质组学筛选法是基于质谱而兴起的一种筛选技术,它既可对未知蛋白组分进行鉴定,还可对鉴定结果进行差异比较,在未知分子的发现和功能特殊的靶分子筛选中发挥着重要作用;随着后基因时代的到来,生物信息学及多组学联合筛选技术使得抗原筛选逐步进入了多维、立体的筛选模式,也使得候选抗原及其表位的功能研究更加深入,这为基因工程疫苗和多肽疫苗候选分子的筛选提供了技术手段。     

MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析

为探究肌生长抑制素（myostatin,MSTN）基因对牛肌肉发育的具体调控机制,本研究选取同一牛场健康鲁西黄牛10头,其中通过转基因技术得到的基因编辑牛MSTN^-/-和同种非转基因野生型牛各5头。分别采集两组牛腿臀肌肉样品,利用IIlumina HiSeq高通量测序技术进行转录组测序分析,通过生物信息学方法比较两组样本间的差异表达基因,并进行GO和KEGG富集分析,最后利用实时荧光定量PCR验证转录组测序数据。结果显示,基因编辑型牛和野生型牛之间共检测到18 071个基因。在log₂|FoldChange|≥ 1.48条件下,筛选出406个差异表达基因,其中347个显著上调,59个显著下调。GO功能富集分析显示,MSTN基因编辑后显著影响915个功能类别（P<0.05）,差异基因主要参与结合、生物系统调节、免疫系统等相关功能。KEGG通路富集分析结果共涉及211个通路,差异基因主要富集在细胞黏附分子、趋化因子信号通路、细胞因子互作等信号通路上,进一步从中筛选出可能参与细胞生长、肌肉发育的差异基因（CD14、KIT、CSF1R、FBP1、DUSP4、ULBP21、PRKCB、SPN、CHAD、SRC）。实时荧光定量PCR检测结果显示,所选差异基因表达水平与转录组表达水平一致,证明测序结果的可靠性。本研究结果表明,MSTN基因发挥作用后可以介导多个下游基因表达,从而影响相关信号通路及生物学过程;同时,所筛选出的差异表达基因可作为进一步研究骨骼肌调控机制的候选靶标。     

重庆万州柑橘轮斑病菌的鉴定及防治药剂筛选

【目的】明确2018年起在重庆万州柑橘种植区新发生病害的病原菌,筛选有效防控药剂,为田间防治该病害和后续深入研究提供理论参考。【方法】通过组织分离法从患病样品中获得菌株,进行病原菌形态学、分子生物学和致病性鉴定,采用生长速率法测定不同药剂对目标菌株的毒力。【结果】此病害的病原菌为柑橘轮斑病菌Pseudofabraea citricarpa。病原菌对万州地区主栽的8个品种柑橘的叶、枝、果和昭通苹果及砀山酥梨果实具有致病性。苯醚甲环唑、咪酰胺、甲基硫菌灵等17种杀菌剂的EC50值小于3 mg/kg,代森锰锌与啶酰菌胺1：64比列复配、克菌丹与苯醚甲环唑1：1比例复配、代森锰锌和矿物油1:50比例复配对菌株生长抑制效果良好。【结论】重庆万州柑橘种植园区发生柑橘轮斑病,病原菌对柑橘枝、叶、果和其它果树果实都具有致病性。17种药剂单用或复配对病原菌生长有抑制作用,可进一步用于田间实验。     

新靶标铁苋菜在除草化合物筛选研究中的应用

铁苋菜具有特殊的生物学特性,属于旱田难防杂草。采用商品化除草剂硝磺草酮及巴佰金对铁苋菜进行室内防除试验,同时验证与硝磺草酮及巴佰金结构类似的新化合物对其的防除活性。结果表明,结构类似的除草化合物对铁苋菜的防除活性较为接近;铁苋菜作为新的生测靶标,可应用于化合物除草活性生测筛选研究。     

杨树烂皮病药剂筛选及防治技术

对杨树烂皮病的化学防治药剂进行筛选结果表明，可杀得（53．8％干悬浮剂）、甲基硫菌灵（50％可湿性粉剂）、双效灵（10％）有明显的抑菌效果；可杀得（53．8％干悬浮剂）、甲基硫菌灵（50％可湿性粉剂）、双效灵（10％）3种药剂毒力线的回归关系显著。对8种杀菌剂进行杨树烂皮病防治试验的结果表明，可杀得等杀菌剂防治效果达90％，药效显著。     

基于滚筒的打后碎片筛分工艺

为改善打后筛分工艺,降低投资运行成本,方便维护保养,对比分析了分别以振筛和滚筒为关键筛分设备的两种打后筛分工艺,从工艺设计依据、质量分析、投资运行、维护保养和持续改进等方面阐述了滚筒式打后筛分工艺的特性.结果表明,该工艺具有成熟的理论和实践基础,工序本身不会引起片烟过多的造碎和卷曲,而且在设备投资、维护保养和改进空间等方面,具有振筛式打后筛分工艺所无法比较的优越性.     

采用通用引物PCR配合SSCP和RFLP技术检测鱼病病原菌

采用通用引物PCR（UPPCR）、PCR－RFLP、PCR－SSCP技术，研究快速鉴别鱼病病原菌的分子生物学诊断技术。结果发现，采用细菌16S rRNA基因保守区特异性引物，以嗜水气单胞菌、鲁克氏耶尔森菌、鳗弧菌、柱状曲挠杆菌、乙型链球菌、荧光假单胞菌等部分常见鱼病病原菌为对象，可以建立一种UPPCR技术。该技术能在保证实验条件不变的基础上，检出上述所有细菌，并还可检出大肠杆菌和双歧杆菌等非鱼病病原菌。并且认为，该法与SSCP配合即采用UPPCR－SSCP技术能较好地鉴别被检菌而用于鱼病病原菌的快速诊断。     

优质蜜环菌菌株的初步筛选

为了筛选出优质的蜜环菌菌株供猪苓的生产应用,比较了20株蜜环菌菌株的生长速度、菌索分枝、菌索直径、韧性以及菌丝的蕈香味等生物学特性。结果表明:菌株AM-06、AM-08、AM-12和AM-13均表现出优良的生长性状,表现在有大量的白色菌丝,萌发和生长较快,菌索分枝较多,尖端幼嫩,菌索粗壮,韧性极好,菌索长满平皿后有浓郁的蕈香味。     

干旱条件下花生品种筛选试验

以山东省12个主推大花生品种为试材，研究干旱条件（播种至开花下针期不浇水）下各品种的表现，筛选出4个适宜菏泽生态条件栽培的抗旱品种，其主茎高平均36．1cm，侧枝长平均39．6cm，主要农艺性状间表现出正相关性；不抗旱品种营养相关性状与产量相关性状表现为负相关。